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멀티모드 리더에서 세포 계수, 생존율 분석 및 살아있는 세포 이미징 측정까지 Tecan의 Spark®로 이 모든 것이 가능합니다. Spark는 리더에 내장된 간단하고 비용 효율적인 세포 이미징 모듈을 통해 자동 세포 계수 및 생존율 분석, 마이크로플레이트에서 명시야 이미징 및 자동 밀도 평가를 수행할 수 있습니다. 이러한 통합 기능을 통해 Spark는 세포 기반 연구에 더 나은 품질과 관련성 있는 데이터를 제공하고 살아있는 세포 이미징의 흥미로운 세계로의 문을 엽니다.
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Tab 01 / Live viewer
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분석을 시작하기 전의 궁극적인 확인
Spark를 사용하면 버튼 하나만 터치하면 마이크로플레이트 리더를 자동 현미경으로 바꿀 수 있습니다. Spark의 이미징 모듈에는 LED 명시야 조명, 4배 대물렌즈 배율, CMOS 1.3메가픽셀 카메라 및 견고한 레이저 기반 자동 초점 시스템이 포함되어 있어 자동 현미경과 맞먹는 성능을 제공합니다.
The SparkControl™ 소프트웨어의 Live Viewer 애플리케이션을 사용하면 사용자가 마이크로플레이트 well 또는 Tecan의 Cell Chip™에서 정의된 위치의 이미지를 자동으로 수집하고 즉시 볼 수 있습니다.
쉽게 well 내부 및 well 간 탐색으로 리더 내에서 간단한 명시야 현미경 관찰이 가능합니다.
Live Viewer를 사용하면 사용자가 자동화된 well 이미징 방법을 시작하기 전에 초점 오프셋을 수동으로 재조정할 수도 있습니다.
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Tab 02 / Cell counting and viability
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트립신 처리된 세포 등 용액 내 세포의 계수 및 생존율 평가는 세포 배양을 하는 모든 실험실에서 일상적인 작업입니다. Spark의 세포 이미징 모듈은 사용하기 쉬운 일회용 Cell Chip™을 통해 자동화된 무표지 세포 계수 및 트리판 블루 기반 세포 생존율 분석을 제공합니다.
트립신화 세포와 같은 용액 내 세포의 계수 및 생존율 평가는 모든 세포 배양 실험실에서 일상적인 작업입니다. Spark의 세포 이미징 모듈은 사용이 간편한 일회용 Cell Chip™ 을 통해 자동화된 라벨 없는 세포 계수 및 트리판 블루 기반 세포 생존율 분석을 제공합니다.
세포 계수 앱과 세포 생존율 앱은 모두 동일한 기능을 제공하며, 유일한 차이점은 생존율 앱이 결과 계산 시 트리판 블루 희석 비율을 1:1로 자동으로 고려한다는 것입니다.
사용자는 측정 시작 전 세포 크기를 4~90µm로 설정하여 선택한 세포주에 맞춰 분석법을 조정할 수 있습니다.
계수 정확도와 재현성을 높이기 위해 챔버당 1개, 4개 또는 8개의 이미지를 선택할 수 있습니다. 이를 통해 각 챔버 중앙에서 단일 이미지를 촬영하여 상대적으로 높은 세포 농도(약 1x106 cells/ml)의 경우 빠른 세포 계수가 가능합니다. 반면, 1x10^4 cells/ml 미만의 낮은 세포 농도의 경우, 샘플당 8개의 개별 이미지를 사용하여 세포 농도 측정의 정확도를 크게 향상시킬 수 있습니다. 또한, 각 슬라이드의 두 챔버를 '중복'으로 정의하여 자동 평가할 수 있습니다.
세포 계수 및 세포 생존율 결과는 소프트웨어 대시보드의 표와 히스토그램으로 명확하게 표시되어 세포 집단의 크기 분포를 간편하게 분석할 수 있습니다. 모든 결과는 PDF 보고서로 저장되어 쉽고 편리하게 데이터를 보관할 수 있습니다.
This Technical Note describes the functions and benefits of the Spark multimode microplate reader and cell imaging module, as well as the SparkControl software and its dedicated Cell Counting and Cell Viability Application.
In this technical note, we demonstrate the superior performance of the Spark reader compared to two other multimode readers from different providers. The detection limit for the far red fluorescent dye Alexa Fluor 647 – which has a fluorescence spectrum comparable to Cy5 – was determined, operating each instrument in MCR mode.
Cell counting, viability analysis and determination of size distribution are routinely performed by researchers across multiple disciplines, from standard cell passaging for downstream experiments to using insect cells infected with baculovirus to produce recombinant proteins, or determining the differentiation capacity of stem cells. Tecan’s Spark multimode reader has an integrated, bright field cell imaging module. This patent-pending system enables label-free cell counting, size distribution determination and trypan blue-based cell viability analysis with an easy-to-use, disposable Cell Chip™. In this study, the analysis of cell concentration, cell viability and size distribution for the determination of the optimal protein production rate in recombinant Sf21 cell cultures is presented.
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Tab 03 / Live-cell imaging and confluence
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주어진 시간 동안 마이크로플레이트 well 바닥에 부착되는 세포의 수는 성장과 부착 속도가 여러 요인의 영향을 받기 때문에 정량화하기 어려울 수 있습니다. 따라서 재현 가능한 분석 및 실험 데이터 해석을 위해서는 세포 합류 수준을 일관되게 측정하고 세포 수를 추정하는 것이 중요합니다.
Spark의 세포 이미징 모듈을 사용하면 well의 합류 수준을 10~90%까지 정확하게 결정할 수 있어 분석에 대한 새로운 수준의 데이터 품질을 제공합니다.
사용하기 쉬운 SparkControl™ 소프트웨어 앱을 사용하면 well 내에서 다양한 이미징 영역을 선택할 수 있습니다. 분석법에 따라 well 중앙의 단일 이미지 또는 여러 이미지로 구성된 전체 well 이미지를 선택할 수 있으며, 마이크로플레이트 크기의 차이를 보정하기 위해 well 경계를 자동으로 감지합니다.
Confluence는 실시간으로 평가되며, 대시보드에 데이터가 표시되고 추가 데이터 분석을 위해 Excel®로 직접 내보내집니다. 각 confluence 값은 원시 이미지 및 분석된 이미지와 직접 연결되어 세포 confluence를 빠르고 쉽게 시각적으로 확인할 수 있습니다.
confluence 측정은 섬유아세포와 같은 저대비 세포에서도 탁월한 감도를 제공하도록 설계된 알고리즘을 사용하여 세포 형태와 완전히 독립적으로 이루어집니다. 따라서 Spark의 confluence 측정 앱은 거의 모든 유형의 세포와 호환되어 분석 결과를 개선하는 데 사용하기 쉬운 접근 방식을 제공합니다.
투명한 96웰 마이크로플레이트에서 촬영한 CHO(중국 햄스터 난소) 세포의 샘플 이미지입니다.
투명한 24웰 마이크로플레이트에서 촬영한 HeLa 세포(인간 상피 자궁경부 선암)의 샘플 이미지입니다.
투명한 48웰 마이크로플레이트에서 촬영한 A431(인간 표피암) 세포의 샘플 이미지입니다.
For many cell biology applications – such as the identification and separation of high expression clones or knock-down candidates, and small-scale antibody or protein production – it is important to ensure that cell lines originates from a single cell, i.e. they are monoclonal. This can be a major bottleneck, especially for academic laboratories, as dedicated automated microscopy systems are both very expensive and complex to operate, meaning verification of monoclonality is often performed by manual microscopy.
Tecan’s Spark multimode microplate reader with integrated cell imaging simplifies cell culture, featuring quality checks and signal normalization to cell confluence, thereby boosting automation of cell-based studies.
Cell migration is a central process in the development and maintenance of multicellular organisms, with tissue formation during embryonic development, wound healing and immune responses all requiring the orchestrated movement and assembly of cells.
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Tab 04 / Live-cell package
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세포 생물학자로서의 당신의 삶은 시간과 요일에 관계없이 세포를 건강하게 유지하는 데 달려 있습니다. 워크플로우를 자동화하여 시간을 관리하고 세포를 건강하게 유지하세요. Spark는 자동 인큐베이터, 마이크로플레이트 리더, 세포 이미저의 기능을 하나로 결합하여 당신과 당신의 연구실에 새로운 가능성을 제공합니다.
Spark는 마이크로플레이트의 균일한 가열을 위해 정밀한 온도제어 기능을 갖추고 있습니다. 균일한 온도 분포를 위해 마이크로플레이트 챔버는 광학 장치와 열적으로 분리되어 있어 분석 시 안정적이고 정밀한 온도 조절을 보장합니다.
Spark는 CO2/O2 분압 제어를 간편하게 제공하여 환경 제어 기능을 한층 강화합니다. 통합 가스 제어 모듈(GCM™)은 CO2 농도를 0.04 ~ 10 % (vol.), O2 농도를 0.1 ~ 21 % (vol.)로 조절하여 세포에 이상적인 환경을 조성합니다. CO2 조절은 장기간의 동역학 연구동안 세포 건강을 유지하고 O2 조절은 미호기성 생물이나 생리학적 조건을 모방하는데 적합한 환경을 유지합니다.
95 % 이상의 습도 조절은 우수한 세포 생존율과 성장을 위한 또 다른 핵심요소이며, 장기간 분석시 일정한 농도를 유지하기 위해서는 증발을 최소화하는 것이 필수적입니다. Spark의 Humidity Cassette 는 모든 SBS 포맷 마이크로플레이트의 증발을 최소화하는 비용 효율적인 솔루션입니다.
이 도구에는 충진 해자(filling moat)가 포함되어 있으며, 당사의 고유한 Lid Lifter™와 함께 사용할 수 있는 특수 뚜껑이 있어 모든 분석에서 수동 습도 조절이 가능합니다. 충진 해자에 ddH2O를 첨가하기만 하면 마이크로플레이트 챔버에 즉각적이고 간편한 가습 환경을 조성할 수 있습니다.
Spark는 integrated lid lifting 이라는 새로운 유형의 리더 자동화 기능을 제공하여 새로운 워크플로우 가능성을 창출하고, 샘플 오염 위험을 줄이며, 장기 동역학 분석에 이상적인 환경을 조성합니다. 수동 조작 없이 화합물을 분주하거나 증발 방지 기능을 손상시키지 않으면서 최적의 환경 조건을 유지하려는 경우, Spark만이 이러한 작업을 수행할 수 있는 유일한 리더입니다.
SparkControl™은 장기 동역학 분석 자동화와 동역학 컨디셔닝, 원격 조작, Open Kinetics와 같은 고급 기능을 결합하여 복잡한 실험 설정에 대한 핸즈오프 솔루션을 제공합니다.
많은 생세포 동역학 실험은 특정 신호 레벨이나 OD 값에 도달하면 화합물 첨가와 같은 특정 동작을 요구합니다. 수동 환경 제어 기능이 장착된 다중 모드 판독기는 이러한 유형의 연구를 복잡하거나 오류 발생 가능성이 높을 수 있습니다.
SparkControl 의 운동 조절 기능 을 사용하면 제어 웰에서 사전 정의된 신호에 도달하자마자 필요한 작업을 자동으로 수행하도록 시스템을 프로그래밍할 수 있으며, 뚜껑이 있거나 없는 마이크로플레이트에서 생각할 수 있는 거의 모든 분석 워크플로에 적합합니다.
SparkControl의 원격 제어 기능을 사용하면 실험실 외부에서도 기기를 모니터링하고 작동할 수 있습니다. 이를 통해 판독기 앞에 몇 시간씩 앉아 있을 필요 없이 전체 시스템을 제어할 수 있습니다. 인터넷에 연결되어 있다면 실험에 연결된 것입니다.
멀티 모드 리더는 다양한 사용자가 여러 용도로 자주 사용합니다. 장기간의 생세포 동역학 분석은 리더를 장시간 작동을 중단시켜 실험실 전체 처리량을 제한할 수 있습니다. SparkControl은 효율적인 솔루션인 Open Kinetics를 제공합니다. 이 기능을 사용하면 동역학 실험을 일시 중지하고 재개하여 장기 연구 기간 동안 추가 측정을 수행할 수 있습니다. 이를 통해 다른 사용자가 장비를 자유롭게 사용할 수 있어, 공유 실험실 장비의 주요 병목 현상 중 하나를 제거하는 동시에 귀중한 연구에도 지장을 주지 않습니다.
Tecan’s Spark multimode microplate reader was used to identify metabolic changes during the differentiation of human mesenchymal stem cells and to assess and quantify cell viability, cytotoxicity and apoptosis, using several well-established and reliable cell-based assays developed by PromoCell.
Tecan’s Spark multimode microplate reader was used for the real-time analysis of human stem cell proliferation and differentiation, using established assays for cell viability, proliferation and apoptosis assessment in a reliable and convenient manner.
Assaying cells in an appropriate window of time after a compound-¬mediated cytotoxic event can be extremely challenging. This note describes the automation for kinetic monitoring of cytotoxicity and viability using three Promega assays for viability, cytotoxicity and apoptosis assessment with the Spark multimode reader.
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Tab 05 / Specification
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1 - Imaging mode: Bright field
2 - Objective magnification: 4x
3 - Autofocus: Laser-based
4 - Camera: CMOS 1.3 megapixel
Illumination: High power LED (590 nm)
Optical resolution: >3 µm
Read speed: <5min
(1 image per well for 96-well plate)
연구용으로만 사용.